葛根和乌梅具有药用价值，含有活性成分如异黄酮、三萜类化合物等，这些成分对于保护肝脏免受脂肪变性和炎症的影响具有积极作用。

两者组成的复合物如葛根乌梅饮，具有养肝健脾、解酒保肝的功效，对酒精引起的肝损伤有较好的保护作用。鉴于社会发展带来的嗜酒人群增加，由酒精引起的肝疾病日益增加，因此以多组学研究酒精性肝病的中药缓解方法具有社会现实意义。

 

一、材料方法

葛根和乌梅按1:1的质量比混合，提取浓缩得固态复合物（PPC），提取物溶于甲醇后，采用UPLC-MS/MS平台进行成分分析。酒精性肝损伤模型通过持续14天灌胃白酒来建立，60只昆明小鼠随机分为对照组、肝损伤组、水飞蓟宾治疗组、低、中、高剂量PPC治疗组，分别收集粪便、血液、肝脏和回肠样本待测。

对肝样本进行了转录测序分析差异表达基因， 对粪便样本进行了16S rRNA测序分析肠道微生物群落结构变化，血清生化指标检测包括ALP、ALT、AST、TC、TG等，测定了肝中GSH、CAT、SOD、IL-6等。验证手段包括免疫组织化学和Western blotting，进一步验证了相关标志物的变化情况。

 

二、结果讨论

研究发现，葛根-乌梅复合物能够纠正酒精性肝病（ALD）早期阶段的脂质代谢紊乱，减少酒精引起肝脏脂肪累计，恢复血清中AST、ALT、TC等指标，提高SOD、GSH和CAT活性而增强抗氧化应激反应，通过下调TLR4、CD14和MyD88等蛋白来调节NF-κB信号通路，来抑制炎症因子如IL-6、IL-1β和TNF-α的释放，恢复occludin、claudin-4和ZO-1的表达，维持肠黏膜屏障的完整性。

16S基因测序显示，ALD模型组中Bacteroidota门细菌的数量减少，肠道微生物多样性降低，经PPC处理后，细菌多样性得到恢复，Muribaculaceae、Streptococcus等有益菌群增多，影响多种脂质代谢相关通路，如类固醇激素生物合成、花生四烯酸代谢以及初级胆汁酸生物合成等。强调了肠道微生物群对于酒精性肝病发展的重要作用，即PPC通过恢复肠道微生物平衡，通过“肠道-肝脏轴”的调节机制间接改善肝脏状况。

 

三、研究结论

该研究通过液相色谱-质谱（LC-MS）、转录组学分析、16S rRNA基因测序、血清生化指标检测以及组织学检查等多种技术手段，评估了葛根-乌梅复合物（PPC）对酒精性肝病（ALD）的治疗效果。

研究发现，PPC能够调节脂质代谢，抑制炎症反应，增强抗氧化应激能力，并恢复肠道微生物群落结构，从而有效缓解ALD症状。这些结果不仅展示了PPC作为潜在治疗手段的应用前景，还揭示了其在调节脂质代谢、抑制炎症及改善肠道微生物平衡方面的具体机制，为开发新的功能性食品或药物提供了科学依据，具有重要的科学价值和临床意义。

图1. 显示葛根-乌梅复合物（PPC）的成分分析及酒精性肝病（ALD）小鼠肝脏转录组学结果

A．PPC的UPLC-MS/MS分析结果，黑色、红色和绿色线条分别代表UPLC（PDA检测器）、正离子模式和负离子模式的结果。
B．火山图显示ALD相关基因，蓝色和红色分别表示下调和上调。
C．与ALD相关基因的GO分析，包含生物过程BP、分子功能MF、细胞组分CC等，与脂质代谢相关的GO注释用红色圈出。
D．与ALD相关基因的KEGG通路分析。

图2. 显示16S rRNA的分析结果，比较了葛根-乌梅复合物（PPC）处理与否的酒精性肝病（ALD）小鼠的肠道微生物群落异同

A． 肠道微生物在门水平上的物种组成条形图。
B． 肠道微生物α多样性差异，包含（ACE指数和Shannon指数）。
C． 肠道微生物共有独特特征花瓣图。
D． 肠道微生物基于加权Unifrac算法的ANOSIM分析（R = 0.425, p = 0.001）。
E． 肠道微生物基于加权Unifrac算法的NMDS分析（应力值Stress = 0.1908）。
F． 肠道微生物LEfSe的系统发育树。
（图像说明：o表示目；f表示科；g表示属；s表示种。Con为对照组；Mod为白酒处理组；Pos为水飞蓟宾组；Low为低剂量PPC组；Med为中剂量PPC组；Hig为高剂量PPC组。）

图3. 显示葛根-乌梅复合物（PPC）处理与否的酒精性肝病（ALD）小鼠16S rRNA 测序数据的KEGG分析。Mod表示白酒处理组；Hig表示高剂量PPC组，与脂质代谢相关的注释用红色圈出。

图4. 显示各组小鼠表型特征情况

A． 小鼠体重变化。
B． 小鼠肝脏体重比的差别。
C． 小鼠血清肝功能生化指标（AST、ALT、ALP、TC、TG、LDL-C）的检测结果。
（图像说明：Con为对照组；Mod为白酒处理组；Pos为水飞蓟宾组；Low为低剂量PPC组；Med为中剂量PPC组；Hig为高剂量PPC组。）

图5. 显示肝组织的H&E（HE）染色和油红O（ORO）染色

在组织学图像中，显微镜放大倍数为10×和40×，标尺长度分别为100 μm和20 μm。黑色箭头指示淋巴细胞浸润的位置，红色箭头指示退化和坏死的肝细胞。Con表示对照组；Mod表示白酒处理组；Pos表示水飞蓟宾组；Low表示低剂量PPC组；Med表示中剂量PPC组；Hig表示高剂量PPC组。

图6. 显示PPC通过抗氧化活性和恢复肠道屏障完整性来缓解酒精性肝病（ALD）小鼠的炎症

A．血清抗氧化应激标志物MDA、CAT、GSH和SOD的ELISA检测结果。
B．血清炎症IL-6、IL-1β 和 TNF-α的ELISA结果。
C．NF-κB信号通路的关键组成p65蛋白的Western blotting结果。
D．NF-κB信号通路的关键组成蛋白（TLR4、CD14、IκBα 和 P65）的Western blotting结果。
E．肠道蛋白标志物（ZO-1、occludin 和 claudin-4）的Western blotting结果。
（图像说明：Con为对照组；Mod为白酒处理组；Pos为水飞蓟宾组；Low为低剂量PPC组；Med为中剂量PPC组；Hig为高剂量PPC组。）

 

参考文献

Gao R, Huang Q, Zeng Y, Chen D, Jia Z, Han B, Huang X, Wang Q, Hu X, Liao M, Li J. Pueraria lobata-Prunus mume Complex Alleviates Alcoholic Liver Disease by Regulating Lipid Metabolism and Inhibiting Inflammation: A Transcriptome and Gut Microbiota Analysis. Foods. 2024 Aug 1;13(15):2431. doi: 10.3390/foods13152431. PMID: 39123621; PMCID: PMC11311716.