氨基酸在肥料、农业、食品、生物、医学等领域具有广泛的应用。样品中的氨基酸可能以游离态、蛋白质或多肽的形式存在。氨基酸含量的检测，应根据样品和检测目的不同，选择不同的预处理方案。

 

　　氨基酸（Amino Acid）

　　氨基酸是一类含有氨基和羧基的有机化合物的统称，是蛋白质的基本组成单位。生物界中构成天然蛋白质的氨基酸主要为α-氨基酸，包括20种常见氨基酸及2种不常见氨基酸，按照其结构的不同主要分为极性氨基酸及非极性氨基酸2大类，其中极性氨基酸又根据其所带电荷分为中性氨基酸、碱性氨基酸、酸性氨基酸3类。

 

　　1.总氨基酸的测定

　　饲料、食品样品一般检测总氨基酸，样品中氨基酸主要以蛋白质或者多肽等形式存在时，利用水解法对样品进行预处理，目前没有单一的水解方法可以将所有种类的氨基酸都不破坏水解出来。

　　常规酸水解法是使用6mol/L的盐酸对样品进行水解，主要适用于除色氨酸及含硫氨基酸（胱氨酸、半胱氨酸、蛋氨酸）外的其他氨基酸的测定。

　　氧化酸水解法是利用过甲酸氧化，并用盐酸对蛋白质水解，适用于含硫氨基酸的测定，当使用偏重亚硫酸钠为氧化终止剂时可测定除酪氨酸、色氨酸以外的其他蛋白水解氨基酸；以氢溴酸为终止剂时，可测定除酪氨酸、苯丙氨酸、组氨酸和色氨酸以外的氨基酸。

　　碱水解法是使用氢氧化锂溶液对样品进行水解，适用于测定样品中色氨酸的含量。

　　一般来说，样品中的蛋白质含量、水解液的使用量、水解管封闭情况，水解时间及温度都会影响样品水解的氨基酸回收率。

 

　　2.游离氨基酸的测定

　　肥料样品一般检测游离氨基酸。《水溶肥料游离氨基酸含量的测定》（NY/T 1975—2010）使用酸提取法对样品中的游离氨基酸进行提取，但是检测之前需要去除其中的蛋白质和金属离子。蛋白质选用磺基水杨酸进行去除，金属离子用EDTA进行去除。

　　氨基酸检测方法主要分为分光光度法、毛细管电泳法、近红外光谱法、气相色谱法、高效液相色谱法、质谱法等大类。其中高效液相色谱法是水溶肥料及饲料中相关检测最常见的检测方法。由于大多数氨基酸本身不具备光吸收和荧光反应，因此需要进行衍生化处理。

　　《水溶肥料游离氨基酸含量的测定》（NY/T 1975—2010）标准中首选方法使用的是氨基酸自动分析仪，采用强酸性的阳离子交换树脂进行分离，茚三酮柱后衍生进行检测，主要可测定天冬氨酸、苏氨酸、丝氨酸、谷氨酸、脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、胱氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸、组氨酸及精氨酸17种氨基酸含量。该方法检出限在0.5μmol/L~2μmol/L以下，且稳定性好，重复性好，但是检测用时偏长。由于使用强酸性的阳离子交换柱，因此不能测定色氨酸含量。如果样品中的氨基酸主要以色氨酸为主，则需参考《饲料中色氨酸的测定》（GB/T 15400—2018）中的方法，利用C18色谱柱分离再用紫外检测器（λ=280nm）或荧光检测器（λem=343nm，λex=283nm）来进行检测。

 

　　3.检测方法的选择

　　总氨基酸是将样品中蛋白质、多肽中的氨基酸水解出来后进行再测定，不同的前处理方法会得到不同种类的氨基酸。

　　游离氨基酸是测定样品中处于游离状态的氨基酸，水溶肥料中游离氨基酸的测定方法需要采用NY/T 1975—2010，该方法测定了17种氨基酸的含量，但不包含色氨酸。

　　企业在购买原料以及生产中，应充分了解氨基酸的种类和存在形式，避免因原料选择错误导致对产品质量的误判。

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